Uma análise dos principais diagnósticos de Sars-cov-2 disponíveis no Brasil: uma revisão de literatura / Diagnosis and main types of coronavirus in humans: a narrative review / Diagnóstico y principales tipos de coronavirus en humanos: una revisión narrativa

Introdução: Com a emergência do SARS-CoV-2 foi disponibilizado uma grande quantidade de ferramentas de diagnóstico. Neste contexto, a falta de vacina, de tratamento e o grande número de casos graves e morte, possibilitou a aprovação emergencial de diversos testes, que ainda necessitam de estudos populacionais para seu registro definitivo. Objetivo: Realizar uma revisão de literatura para avaliar as metodologias de diagnóstico disponíveis no Brasil, de acordo com a realidade local de saúde, explorando o momento epidemiológico a complexidade do teste e a finalidade da sua aplicação. Metodologia: Trata-se de um estudo bibliográfico, descritivo do tipo revisão de literatura. Foram utilizadas as seguintes bases de dados científicos para buscas: PUBMED, MEDLINE, LILACS E COCHRANE LIBRARY, através de descritores selecionados na plataforma DECS. Resultados: O cenário de diversos ensaios, baseados em diferentes metodologias, como os testes baseados em RNA viral, em detecção de antígenos virais ou de anticorpos, associados ao conhecimento da história natural do vírus, possibilita uma análise crítica do melhor diagnóstico de acordo com a clínica do paciente, os epidemiológicos, o objetivo do diagnóstico e a acurácia do ensaio. Atualmente, há mudança no padrão imunológico da população e a descrição de tipos e subtipos de SARS-CoV-2 com mudanças gênicas, que podem levar a mudanças na acurácia diagnóstica ou a re-emergência em surtos de doença grave. Conclusão: Ainda é incerto o caminho evolutivo da história natural da Covid-19 e os ensaios diagnósticos estão em diferentes estágios de desenvolvimento, validação e produção e cada tipo de teste tem suas próprias vantagens e desvantagens distintas inerentes a plataforma tecnológica de origem e uma combinação de tipos de testes usados em momentos diferentes pode ser útil para a condução clínica dos pacientes e no controle da pandemia por SARS-CoV-2.

Introduction: With the emergence of SARS-CoV-2, a large number of diagnostic tools were made available. In this context, the lack of vaccine, treatment and the large number of severe cases and death, allowed the emergency approval of several tests, which still require population studies for their definitive registration. Objective: To carry out a literature review to evaluate the diagnostic methodologies available in Brazil, according to the local health reality, exploring the epidemiological moment, the complexity of the test and the purpose of its application. Methodology: This is a bibliographic, descriptive study of the literature review type. The following scientific databases were used for searches: PUBMED, MEDLINE, LILACS AND COCHRANE LIBRARY, through selected descriptors on the DECS platform. Results: The scenario of several tests, based on different methodologies, such as tests based on viral RNA, on detection of viral antigens or antibodies, associated with knowledge of the natural history of the virus, allows a critical analysis of the best diagnosis according to the patient's clinical, epidemiological, diagnostic objective and assay accuracy. Currently, there is a change in the immune pattern of the population and the description of types and subtypes of SARS-CoV-2 with genetic changes, which can lead to changes in diagnostic accuracy or the re-emergence in outbreaks of severe disease. Conclusion: The evolutionary path of the natural history of Covid-19 is still uncertain and diagnostic assays are at different stages of development, validation and production and each type of test has its own distinct advantages and disadvantages inherent in the technology platform of origin and a combination of types of tests used at different times can be useful for the clinical management of patients and in the control of the SARS-CoV-2 pandemic.

Introducción: Con la aparición del SARS-CoV-2, se dispuso de un gran número de herramientas diagnósticas. En este contexto, la falta de vacuna, tratamiento y el gran número de casos graves y muerte, permitieron la aprobación de urgencia de varias pruebas, que aún requieren estudios poblacionales para su registro definitivo. Objetivo: Realizar una revisión bibliográfica para evaluar las metodologías diagnósticas disponibles en Brasil, de acuerdo con la realidad sanitaria local, explorando el momento epidemiológico, la complejidad de la prueba y la finalidad de su aplicación. Metodología: Se trata de un estudio bibliográfico, descriptivo, del tipo revisión de literatura. Para las búsquedas se utilizaron las siguientes bases de datos científicas PUBMED, MEDLINE, LILACS Y COCHRANE LIBRARY, a través de descriptores seleccionados en la plataforma DECS. Resultados: El escenario de varias pruebas, basadas en diferentes metodologías, como pruebas basadas en el ARN viral, en la detección de antígenos virales o anticuerpos, asociado al conocimiento de la historia natural del virus, permite un análisis crítico del mejor diagnóstico de acuerdo con la clínica del paciente, epidemiológica, objetivo diagnóstico y precisión de la prueba. Actualmente, hay un cambio en el patrón inmunológico de la población y la descripción de tipos y subtipos de SARS-CoV-2 con cambios genéticos, que pueden conducir a cambios en la precisión diagnóstica o la reaparición en brotes de enfermedad grave. Conclusiones: El camino evolutivo de la historia natural del Covid-19 es aún incierto y los ensayos de diagnóstico se encuentran en diferentes etapas de desarrollo, validación y producción y cada tipo de prueba tiene sus propias ventajas y desventajas distintas inherentes a la plataforma tecnológica de origen y una combinación de tipos de pruebas utilizadas en diferentes momentos puede ser útil para el manejo clínico de los pacientes y en el control de la pandemia de SARS- CoV-2.

Persistent SARS-CoV-2 antigen presence in multiple organs of a naturally infected cat from Brazil

Background: Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2) is the etiological agent of the disease coronavirus 2019 (COVID-19) in humans. SARS-CoV-2 has been identified in cats with or without clinical signs. Case presentation: We describe the pathological and molecular findings in a six-month-old asymptomatic cat with SARS-CoV-2 infection from Brazil, belonging to a human family with COVID-19 cases. The pool of nasopharynx and oropharynx swabs at day zero tested positive by RT-qPCR for SARS-CoV-2. No amplification resulted from molecular testing performed on days 7 and 14. The cat was hit by a car and died 43 days after the molecular diagnosis. Immunohistochemistry at post-mortem examination demonstrated nucleocapsid protein in samples from the lungs, kidneys, nasal conchae, trachea, intestine, brain and spleen. Conclusion: The present study has highlighted the possibility that viral antigens can be detected by immunohistochemistry in multiple organs six weeks after infection, although the same tissues tested negative by RT-PCR.(AU)

Estudio del desempeño de dos métodos de detección de antígenos rápidos en hisopados combinados y en hisopados nasofaríngeos para la detección de SARS-CoV-2 / Performance study of two rapid antigen detection methods in combined swabs and nasopharyngeal swabs for detection of SARS-CoV-2

Resumen Se realizó una comparación del desempeño de los métodos rápidos de detección de antígenos para el diagnóstico de SARS-CoV-2 Veritor System de Becton Dickinson y Panbio de Abbott versus una reacción en cadena de la polimerasa con retrotranscripción en tiempo real (RT-PCR) de Roche en un triage de demanda espontánea de pacientes febriles de un hospital público, para la detección de COVID-19. Se procesaron 36 hisopados de pacientes sospechosos por los tres métodos. La concordancia entre ambos métodos con la RT-PCR fue del 97%. La sensibilidad de los métodos de detección de antígenos versus la RT-PCR fue del 83% y la especificidad fue del 100%. El valor predictivo positivo (VPP) fue del 100% y el valor predictivo negativo (VPN) fue del 97%. La muestra que resultó discordante presentó un ciclo umbral (Ct) de 29,8. El método para detección de antígenos tuvo un desempeño aceptable, incluso con resultados de sensibilidad mayores que los declarados por los fabricantes (84% para el Veritor System y 93,3% para el Panbio).

Abstract A comparison of the performance of the rapid antigen detection methods for the diagnosis of SARS-CoV-2 Veritor System from Becton Dickinson and Panbio from Abbott versus a real-time polymerase chain reaction with reverse transcription (RT-PCR) Roche in a spontaneous demand triage of febrile patients of a public hospital was made, for the detection of COVID-19. Thirty six swabs from suspected patients were processed by the three methods. The concordance between both methods with RT-PCR real time was 97%. The sensitivity of the antigen detection methods versus RT-PCR real time was 83% and specificity was 100%. The positive predictive value (PPV) was 100% and the negative predictive value (NPV) was 97%. The sample that was discordant presented a threshold point (Ct) of 29.8. The method for antigen detection resulted in an acceptable performance, even with S results higher than those declared by the manufacturers (84% for the Veritor System and 93.3% for the Panbio).

Resumo Uma comparação do desempenho dos métodos rápidos de detecção de antígenos para o diagnóstico deSARS-CoV-2 Veritor System de Becton Dickinson e Panbio de Abbott versus uma reação em cadeia da polimerasecom transcrição reversa em tempo real (RT-PCR) da Roche em uma triagem de demanda espontâneade pacientes febris de um hospital público, para a detecção de COVID-19. Foram processadas 36 amostrasde esfregaços de pacientes suspeitos pelos três métodos e a concordância entre os dois métodos com aRT-PCR foi de 97%. A sensibilidade dos métodos de detecção de antigenos versus a RT-PCR foi de 83% ea especificidade de 100%. O valor preditivo positivo (VPP) foi de 100% e o valor preditivo negativo (VPN)foi de 97%. A amostra que resultou discordante apresentou um ciclo limiar (Ct) de 29,8. O método paradetecção de antígenos teve um desempenho aceitável, mesmo com resultados de sensibilidade superioresaos declarados pelos fabricantes (84% para o Veritor System e 93,3% para o Panbio).

Sistema Rh-Hr y variantes del antígeno D en tres poblaciones afroecuatorianas del Valle del Chota / Rh-Hr system and D antigen variants in three Afro-Ecuadorian populations in the Chota Valley / Sistema Rh-Hr e variantes do antígeno D em três populações afro-equatorianas no vale do Chota

Resumen La identificación inequívoca del antígeno D en medicina transfusional es de vital importancia para evitar reacciones postransfusionales y la enfermedad hemolítica del recién nacido. Es común el uso de reactivos serológicos monoclonales o tarjetas de gel y su interpretación está definida por cruces, de acuerdo con la reacción serológica. El propósito de este estudio fue determinar la frecuencia del factor Rh y las variantes del antígeno D en una población afroecuatoriana. Se trató de un estudio descriptivo, transversal con muestreo aleatorio simple de 541 pobladores. Para la tipificación del factor Rh se utilizó la metodología en tubo con antisueros monoclonales y para la detección de las variantes de D se utilizaron tarjetas de gel IDCoombs Anti-IgG. Las lecturas se verificaron mediante el análisis del índice kappa. Se aplicó estadística descriptiva y el análisis de Chi cuadrado para establecer la relación de las variables y su significación. Se identificó una frecuencia del 92% de individuos Rh(D) positivo y un 8% Rh(D) negativo. El 4,80% de los individuos presentaban la variante D débil y el 79% reacciones serológicas entre 2 y 3(+) indicativas de otras variantes del antígeno D. El fenotipo más común fue el R0/R0. Estos datos demuestran la necesidad de confirmar la existencia de variantes del antígeno D en esta población para un mejor manejo de la sangre. Una limitante constituye la disponibilidad de técnicas moleculares para la genotipificación de D; sin embargo, se podría implementar la fenotipificación RHCE como estrategia pretransfusional.

Abstract The unequivocal identification of D antigen in transfusion medicine is of vital importance to avoid post-transfusion reactions and hemolytic disease of the newborn. The use of monoclonal serological reagents or gel cards is common and their interpretation is defined according to the serological reaction by crosses. The purpose of this study was to determine the frequency of Rh factor and D antigen variants in the Afro-Ecuadorian population. This was a descriptive, cross-sectional study with simple random sampling of 541 residents. Tube typing with monoclonal antisera was used to typify Rh factor and ID-Coombs Anti-IgG gel cards were used to detect D variants, and the readings were verified by analysis of the kappa index. Descriptive statistics and Chi-square analysis were applied for the relationship of the variables and their significance. A frequency of 92% of Rh(D) positive individuals and 8% Rh(D) negative individuals were identified. Almost 5% (4.80%) of the individuals presented the weak D variant and 79% serological reactions between 2-3(+) indicative of other D antigen variants, the most common phenotype being R0/R0. These data demonstrate the need to confirm the existence of D antigen variants in this population for better management and availability of blood. A limitation is the availability of molecular techniques for D genotyping, however, RHCE phenotyping could be implemented as a pretransfusion strategy.

Resumo A identificação inequívoca do antígeno D na medicina transfusional é de vital importância para evitar reações pós-transfusionais e a doença hemolítica do recém-nascido. É comum o uso de reagentes sorológicos monoclonais ou cartões de gel e sua interpretação é definida por cruzamentos de acordo com a reação sorológica. O objetivo deste estudo foi determinar a frequência do fator Rh e as variantes do antígeno D numa população afro-equatoriana. Foi um estudo descritivo, transversal, com amostragem aleatória simples de 541 residentes. Para a tipagem do fator Rh foi utilizada a metodologia em tubo com anti-soros monoclonais e para a detecção das variantes de D, os cartões de gel ID-Coombs Anti-IgG. As leituras foram verificadas por análise do índice kappa. Foi aplicada estatística descritiva e para estabelecer a relação das variáveis e sua significação se utilizou a análise do qui-quadrado. Identificando uma frequência de 92% dos indivíduos Rh (D) positivos e 8% Rh (D) negativos. 4,80% dos indivíduos apresentavam a variante D fraca e 79% reações sorológicas entre 2 e 3(+) indicativas de outras variantes do antígeno D, sendo o fenótipo mais comum o R0/R0. Esses dados demonstram a necessidade de confirmar a existência de variantes do antígeno D nessa população para melhor gerenciamento e disponibilidade de sangue. Uma limitação é a disponibilidade de técnicas moleculares para a genotipagem de D, no entanto, a fenotipagem de RHCE poderia ser implementada como uma estratégia de pré-transfusão.

Diagnóstico de la Tricomonas vaginalis en la mujer / Diagnosis of Trichomonas vaginalis in women

OBJETIVO: revisar los diferentes métodos de diagnóstico de la tricomoniasis vaginal disponibles hasta el presente. MATERIALES Y MÉTODOS: se revisó la bibliografía latinoamericano e internacional a través de los sitios electrónicos de Pub-Med y Scielo. RESULTADOS: la Tricomonas vaginalis es considera como la enfermedad de transmisión sexual no viral, curable más frecuente y prevalente en el mundo. Se revisan los diferentes de métodos para diagnosticar la presencia de la tricomonas vaginalis en pacientes femeninos con síntomas y signos de la infección producida por el protozoario flagelado. CONCLUSIONES: se revisaron los diferentes métodos de diagnostico de la infección producida por la Tricomonas vaginalis en pacientes femeninas, desde los clásicos hasta los más actuales que emplean alta tecnología.

OBJECTIVE: to review the different diagnostic methods of Trichomonas vaginal available at the present time. MATERIAL AND METHOD: it was reviewed the Latin-American and international bibliography using the Pub-Med and Scielo web sites. RESULTS: Trichomonas vaginalis is considered the most common and prevalent sexual transmitted disease curable and non-viral worldwide. It was reviewed the different methods to diagnose the presence of Trichomonas vaginalis in female patients with symptoms and signs of infection produces by the flagellate protozoa. CONCLUSION: Different methods of diagnosis of the infection produced by Trichomonas vaginalis, since the classics to the most current methods that use high technology, were reviewed.

Prevalencia del antígeno D débil y su clasificación fenotípica en donantes voluntarios de sangre / Prevalence of "weak" D antigen and its phenotypic classification in voluntary blood donours / Prevalência do antígeno D "fraco" e sua classificação fenotípica em doadores voluntários de sangue

En el campo de la medicina transfusional la correcta identificación de los fenotipos del sistema Rh y en especial del antígeno D debe ser de manera inequívoca por su relevancia clínica. El antígeno D tiene variantes denominadas D parcial, D débil y DEL, las que se producen por mutaciones de los alelos RHD/RHCE o por una supresión en la expresión fenotípica. Se trató de un estudio descriptivo, retrospectivo de corte transversal en el que se realizó una revisión de registros primarios durante el período 2011-2014 validados de acuerdo con el protocolo de Hernández-Sampieri R. Se utilizó estadística descriptiva mediante la aplicación del software informático SPSS versión 22.0 y se estableció la relación entre variables independientes a través del análisis estadístico de Chi-cuadrado. Se determinó una prevalencia de donantes RhD negativos de 1,8 a 2,5% y RhD débil de 1,79 a 2,28%. La fenotipificación serológica permitió identificar que los tipos 2 y 5 eran los más frecuentes. También se estableció la existencia de aloinmunización por anti-D, anti-C y anti-E. Se estableció de esta manera la existencia de D débil y una importante aloinmunización en la población de donantes de sangre tipificados como D negativo y D débil, por lo que se recomienda implementar un algoritmo de identificación del antígeno D en servicios de medicina transfusional.

In the field of transfusion medicine, the correct identification of the phenotypes of the Rh system and especially of the D antigen must be unequivocal for clinical relevance. The D antigen has variants called partial D, weak D and DEL. These are produced by mutations of the RHD/RHCE alleles or a suppression in phenotypic expression. The objective of this study was to establish the frequency of weak D antigen in the population of blood donours from 17 Ecuadorian states and their phenotypic combinations. It was a descriptive, retrospective cross-sectional study performed during the 2011-2014 period and validated with primary records in accordance with the Hernández-Sampieri R protocol. A descriptive statistics through the application of SPSS computer software version 22.0 was used and the relationship between independent variables through the Chi-square statistic method was established. A prevalence of RhD negative donours from 1.8 to 2.5% and weak D 1.79 to 2.28% was observed The serological phenotyping made it possible to identify that type 2 and 5 were the most frequent. The presence of alloimmunization by anti-D, anti-C and anti-E was also established. Besides, the presence of weak D types and significant alloimmunization in the donour population of blood typed as D negative and weak was established, so it is recommended to implement an algorithm for the identification of D antigen in transfusional medicine services.

No campo da medicina transfusional, a correta identificação dos fenótipos do sistema Rh e especialmente do antígeno D deve ser inequívoca devido a sua relevância clínica. O antígeno D tem variantes chamadas de D parcial, D fraca e DEL, as quais são produzidos por mutações dos alelos RHD/RHCE ou por uma supressão na expressão fenotípica. O objetivo deste estudo foi estabelecer a frequência do antígeno D fraco em uma população de doadores de sangue de 17 províncias equatorianas e suas combinações fenotípicas. Foi uma estudo descritivo, retrospectivo de corte transversal em que se realizou uma revisão dos registros primários validados de acordo com o Protocolo Hernández-Sampieri R durante o período 2011-2014. Utilizou-se estatísticas descritivas através da aplicação do software informático SPSS versão 22.0 e a relação entre variáveis independentes através da análise estatística de qui-quadrado. Foi determinada uma prevalência de doadores RhD negativos de 1,8 a 2,5% e RhD fraco de 1,79 a 2,28%. A genotipagem serológica permitiu identificar que os tipos 2 e 5 são os mais frequente. A existência de alo imunização por anti-D, anti-C e anti-E também foi estabelecida. A existência de D fraco e uma alo imunização significativa na população de doadores de sangue tipificados como D negativo e fraco, por isso é recomendado implementar um algoritmo de identificação do antígeno D em serviços de medicina transfusional.

Procedencia y fenotipo del sistema Rh en donantes negativos en un Hemocentro colombiano / Origin and phenotype of the Rh system in negative donors in a Colombian hemocenter

percentIntroducción: El sistema Rh está compuesto por más de 56 antígenos capaces de producir enfermedad hemolítica, definidos por métodos serológicos. Los más importantes y, por ello denominados antígenos mayores del sistema, son los antígenos D, C, c, E y e. Estos antígenos se ubican sobre dos proteínas que se expresan en la membrana de los eritrocitos Rh D y RhCE. Objetivo: Determinar la frecuencia de los antígenos C, c, E y e del sistema Rh en donantes de sangre Rh negativos del Hemocentro Centro Oriente Colombiano. Métodos: Estudio descriptivo de corte transversal que incluyó 193 donantes voluntarios de sangre del Hemocentro Centro Oriente Colombiano, la fenotipificación de los antígenos del sistema Rh se realizó utilizando la técnica en tarjeta gel. Se calculó la frecuencia fenotípica de los antígenos del sistema Rh, en porcentajes y para el procesamiento de la información se utilizó el paquete estadístico SPSS versión 21.0 donde se realizó el análisis de los datos de la población. Como criterios de inclusión ser donante voluntario de sangre y de exclusión, estar hemoclasificado como antígeno DEL, D débil y D parcial. Resultados: Las muestras analizadas fueron obtenidas de la tubuladura central de la unidad fraccionada de glóbulos rojos, identificándose tres fenotipos con la siguiente frecuencia: cde/cde (95,86 por ciento), cde/cdE (3,10 por ciento) y cde/Cde (1,04 por ciento). Los participantes del estudio provenían de diversos municipios del departamento de Boyacá y otras regiones del país como llanos Orientales, Santander y Cundinamarca. Los antígenos del sistema Rh son altamente polimórficos a nivel de poblaciones, dada la importancia inmunológica de los antígenos del sistema Rh, los cuales se ven directamente relacionados con el desarrollo de anemia hemolítica postransfusional y perinatal, la fenotipificación ampliada brinda mayor seguridad transfusional y seguimiento al estado del feto o neonato(AU)

Introduction: The Rh system is composed of more than 56 antigens capable of producing hemolytic disease, defined by serological methods; being the most important and therefore the largest antigens of the system, the antigens D, C, c, E and e. These antigens are located on two proteins that are expressed in the membrane of erythrocytes Rh D and RhCE. Objective: To determine the frequency of the C, c, E and e antigens of the Rh system in Rh negative blood donors of Hemocentro Centro Oriente Colombiano. Methods: A cross-sectional descriptive study that included 193 blood donors from the Hemocentro Centro Oriente Colombiano, phenotyping the antigens of the Rh system, using the gel card technique. The phenotypic frequency of the Rh antigen was calculated, in percentages and for the processing of the information, the statistical package SPSS version 21.0 was used in Spanish where all the analysis of the population data was performed. With inclusion criteria to be a voluntary blood donor and exclusion, be hemoclasified as DEL antigen, weak D and partial D. Results: The analyzed samples were obtained from the central tubulant of the fractionated unit of red blood cells, three phenotypes were identified with a frequency of :cde / cde95.86 percent, cde / cdE 3.10 percent and cde / Cde 1, 04 percent; it was evidenced that the participants come from diverse municipalities of the department of Boyacá and other regions of the country like Eastern Plains, Santander and Cundinamarca. The Rh factor and the antigens of the Rh system are highly polymorphic at the population level, given the immunological importance of the antigens of the Rh system, which are directly related to the development of post transfusion hemolytic anemia and perinatal hemolytic disease, the extended phenotyping provides greater transfusional safety and follow-up to the status of the fetus or neonate(AU)

Expressão e caracterização da glicoproteína D do HSV-1 geneticamente fusionada às oncoproteínas E6 e E7 do HPV-16 e HPV-18 (gDE7E6) em células de mamífero / Expression and characterization of the genetically fused HSV-1 glycoprotein D to E6 and E7 oncoproteins HPV-16 e HPV-18 (gDE7E6) in mammalian cells

O câncer cervical é um dos tipos de câncer mais comuns entre as mulheres, e a infecção persistente pelos HPV-16 e HPV-18 é responsável por 70% dos casos. As vacinas profiláticas disponíveis possuem alta eficácia na prevenção da infecção pelos tipos mais prevalentes de HPV. No entanto, este tipo de abordagem não beneficia mulheres que já apresentam lesões precursoras ou tumores cervicais avançados, e a busca por abordagens terapêuticas para esse tipo de câncer é considerada uma necessidade. A qualidade do antígeno representa um aspecto fundamental para o sucesso de vacinas terapêuticas baseadas em proteínas recombinantes. Neste sentido, os sistemas de expressão em células eucarióticas, como leveduras e células de mamíferos são considerados adequados para a produção de proteínas com aplicação biotecnológica. O objetivo principal deste trabalho contemplou a expressão das proteínas de fusão gDE7E6 do HPV-16 e do HPV-18 e a oncoproteína E7 do HPV-16 em células da levedura Pichia pastoris e expressão da gDE7E6 do HPV-16 e do HPV-18 em células de mamífero HEK293T e CHODG-44 para obtenção de antígenos purificados com futura aplicação em vacinas terapêuticas contra tumores associados ao HPV-16 e HPV-18. Os genes que codificam as proteínas gDE7E6 dos HPV-16 e HPV-18 e da E7 do HPV-16 foram clonados no vetor pPIC9K, os quais foram linearizados por digestão enzimática e utilizados na transformação da P. pastoris. A expressão das proteínas foi analisada nos tempos de 24, 48, 72 e 96 horas, no entanto, não foi observada a produção das proteínas no sobrenadante e nem no lisado celular. Diante desta constatação, iniciamos a expressão das proteínas gDE7E6 do HPV-16 e gDE7E6 do HPV-18 em células de mamíferos HEK293T e CHODG-44. As sequências genéticas das proteínas gDE7E6 do HPV-16 e do HPV-18 foram clonadas no vetor de expressão pNU1 e analisadas por digestão enzimática. Análises de SDS-PAGE e western blot demonstraram a expressão das proteínas gDE7E6 do HPV-16 e do HPV-18 em até 96 horas em células HEK293T. Em paralelo, realizamos a transfecção estável dos plasmídeos contendo as sequencias da gDE7E6 do HPV-16 e gDE7E6 do HPV-18 em células CHO-DG44. Com o intuito de aumentar a expressão das proteínas de interesse na população mista de CHODG-44, realizamos amplificação genômica com metotrexato (MTX), sendo possível observar aumento da expressão das proteínas, conforme aumento gradativo nas concentrações de MTX. Posteriormente, foram feitas tentativas para isolar um clone produtor das proteínas gDE7E6 HPV-16 e HPV-18, através de clonagem por diluição limitante e sistema automatizado, sendo possível isolar um clone para cada construção através de matriz semisólida, confirmado por western blot e citometria de fluxo. Apesar de demonstrar a expressão das proteínas de interesse em sistema de expressão baseado em células de mamífero, o rendimento obtido após a purificação por afinidade ao níquel foi extremamente baixo, o que dificulta a obtenção dos antígenos para fins vacinais

Cervical cancer is one of the most common cancers among women, and persistent infection with HPV-16 and HPV-18 accounts for 70% of the cases. Available prophylactic vaccines are highly effective in preventing infection by the most prevalent types of HPV. However, this type of approach does not benefit women who already have precursor lesions or advanced cervical tumors, and the search for therapeutic approaches to this type of cancer is considered a necessity. Antigen quality represents a key aspect for the success of therapeutic vaccines based on recombinant proteins. In this sense, expression systems based in eukaryotic cells such as yeast and mammalian cells are considered suitable for the production of proteins with biotechnological applications. The main objective of this work was to express the gDE7E6 fusion proteins HPV-16 and HPV-18 and the E7 oncoprotein HPV-16 in Pichia pastoris and expression of gDE7E6 HPV-16 and HPV-18 in mammalian cells HEK293T and CHODG-44 to obtain purified antigens with future applications in therapeutic vaccines against HPV-16 and HPV-18 associated tumors. The genes encoding the gDE7E6 proteins HPV-16 and HPV-18 and E7 HPV-16 were cloned into the pPIC9K vector, which were linearized by enzymatic digestion and used in the transformation of P. pastoris. Expression of the proteins was analyzed at 24, 48, 72 and 96 hours, however, the production of the proteins in the supernatant and in the cell lysate was not observed. In light of this finding, we initiated the expression of gDE7E6 proteins HPV-16 and HPV-18 in mammalian cells HEK293T and CHODG-44. The genetic sequences of gDE7E6 proteins HPV-16 and HPV-18 were cloned into the pNU1 expression vector and analyzed by enzymatic digestion. SDSPAGE and western blot analyzes demonstrated expression of gDE7E6 proteins HPV-16 and HPV-18 within 96 hours in HEK293T cells. In parallel, we performed stable transfection of plasmids containing gDE7E6 HPV-16 and HPV-18 sequences into CHODG44 cells. In order to increase the expression of the proteins in the mixed population of CHODG-44, we performed genomic amplification with methotrexate (MTX), and it was possible to observe an increase in protein expression, as a gradual increase in MTX concentrations. Therefore, attempts were made to isolate a clone producing gDE7E6 proteins HPV-16 and HPV-18 by limiting dilution and automated system, being possible to isolate one clone for each construct through a semisolid matrix, confirmed by western blot and flow cytometry. Despite observing protein expression in mammalian cell-based expression system, the yield obtained after nickel affinity purification was extremely low, which makes it difficult to obtain the antigens for vaccine purposes

Evaluación del desempeño de dos pruebas para la detección de antígeno de Helicobacter pylori en heces / Evaluation of the accuracy of two stool antigen tests for Helicobacter pylori infection

Introducción: la detección de antígeno en heces se ha considerado una prueba prometedora para el diagnóstico de la infección por Helicobacter pylori. Para su introducción en la práctica médica, es un requisito indispensable demostrar el desempeño adecuado del método en la población de estudio. Objetivo: evaluar la capacidad diagnóstica de los sistemas comerciales ELISA SD y SD BIOLINE, del fabricante Standard Diagnostics, Corea, en pacientes cubanos con síntomas gastroduodenales. Métodos: se evaluaron 101 muestras de heces de pacientes previamente clasificados como H. pylori positivos y negativos por las pruebas de referencia de histología y prueba rápida de la ureasa. Se calcularon los parámetros de desempeño de ambos sistemas diagnósticos por el programa EPIDAT 3.1. Resultados: la sensibilidad para los sistemas ELISA SD y SD BIOLINE fue de 85,25 por ciento y 75,41 por ciento, respectivamente. La especificidad para ambos fue de 92,50 por ciento. Los valores predictivos positivos y negativos, los índices de validez y de Youden y la confiabilidad diagnóstica de ambas pruebas fueron satisfactorios. Conclusiones: Los sistemas evaluados exhibieron un desempeño comparable con la histología y la prueba rápida de ureasa para la detección activa de la infección por H. pylori, lo que demuestra su utilidad para el diagnóstico y el manejo oportuno del paciente, sin la necesidad de emplear pruebas invasivas(AU)

Introduction: stool antigen tests have been considered to be promising for the diagnosis of Helicobacter pylori infection. For their incorporation into medical practice, it is indispensable to demonstrate their accuracy in a study population. Objective: evaluate the diagnostic capacity of the commercial systems ELISA SD and SD BIOLINE, Standards Diagnostics, Korea, in Cuban patients with gastroduodenal symptoms. Methods: an evaluation was conducted of 101 stool samples from patients previously classified as H. pylori positive and negative by reference histological tests and the rapid urease test. Estimation was made of performance parameters for both diagnostic systems using the software EPIDAT 3.1. Results: Sensitivity for the systems ELISA SD and SD BIOLINE was 85.25 percent and 75.41 percent, respectively. Specificity for both was 92.50 percent. Positive and negative predictive values, validity and Youden's indices, and diagnostic reliability were satisfactory for both tests. Conclusions: the systems evaluated were found to have a performance level comparable with histological tests and the rapid urease test for active detection of H. pylori infection. This confirms their usefulness for the diagnosis and timely management of patients without having to use invasive tests(AU)

Frecuencia del virus de la hepatitis B (HBV) en estudiantes universitarios de la ciudad de Corrientes, Argentina / Frequency of hepatitis B virus (HBV) in university students in the city of Corrientes, Argentina

El virus de la hepatitis B (HBV) presenta amplia distribución en todo el mundo, con más de 500 millones de individuos infectados. Este microorganismo pertenece a la familia Hepadnaviridae. En el presente trabajo se analizó la presencia del antígeno de superficie del virus (HBsAg) y perfil enzimático (GOT, GPT y FAL) en 292 muestras de suero o plasma de estudiantes universitarios de ambos sexos. De las muestras analizadas una sola resultó "Reactiva" para el HBsAg, lo que representa el 0.34 %, confirmado por técnica de reacción en cadena de la polimerasa.

Summary The Hepatitis B virus (HBV) is widely distributed throughout the world, with more than 500 million infected individuals. Is a virus belonging to the Hepnaviridae family. In the present work was analyzed the presence of HBsAg and enzymatic profile (GOT, GPT, FAL) in 292 serum samples or plasm of university students of both sexes. From analyzed samples so far, only one of them was "reactive" for HBsAg, which represents 0,34%. In addition, the determination of total anti-core antibodies was realised to the latter sample resulting "reactive

Estudio de infestación de caninos con Echinococcus granulosus en la provincia de La Rioja, Argentina / Study of infestatioon of dogs with Echinococcus granulosus in the province of La Rioja, Argentina

Este trabajo fue realizado en la provincia de La Rioja, ubicada en el noroeste argentino. El objetivo fue estimar el porcentaje de heces de caninos con presencia de antígenos de Echinococcus sp. en las distintas regiones de la provincia. Se tomaron un total de 269 muestras de materia fecal seca de caninos, que fueron analizadas por la técnica de copro-ELISA. La zona más afectada fue la zona IV, que contó con un 30,5% de muestras positivas. La zona I, que corresponde al Departamento Capital, tuvo un 12% de positividad. En el resto de las zonas, los porcentajes variaron entre el 11,4 y el 14,8%. Este es el primer estudio en la provincia sobre la existencia de la enfermedad en caninos. La falta de estrategias para el control de la equinococosis ha permitido la dispersión de la enfermedad

This work was conducted in the province of La Rioja, located in northwestern Argentina. The aim of this study was to estimate the percentage of dog feces showing the presence of antigens of Echinococcus sp. in different regions of the province. A total of 269 samples of dried canine stool were taken, which were analyzed by the copro-ELISA technique. The most affected area was zone IV, which had 30.5% of positive samples. Zone I corresponding to the Capital Department of the province had 12% of positivity. In other areas, the percentages ranged between 11.4% and 14.8%. This is the first study in the province of La Rioja on the existence of this disease in dogs. The lack of control strategies has allowed the spread of echinococcosis

Expresión y renaturalización del antígeno protector de Bacillus anthracis: un modelo para evaluar el replegado de proteínas antigénicas recombinantes a gran escala / Expression and refolding of the protective antigen of Bacillus anthracis: A model for high-throughput screening of antigenic recombinant protein refolding

Bacillus anthracis protective antigen (PA) is a well known and relevant immunogenic protein that is the basis for both anthrax vaccines and diagnostic methods. Properly folded antigenic PA is necessary for these applications. In this study a high level of PA was obtained in recombinant Escherichia coli. The protein was initially accumulated in inclusion bodies, which facilitated its efficient purification by simple washing steps; however, it could not be recognized by specific antibodies. Refolding conditions were subsequently analyzed in a high-throughput manner that enabled nearly a hundred different conditions to be tested simultaneously. The recovery of the ability of PA to be recognized by antibodies was screened by dot blot using a coefficient that provided a measure of properly refolded protein levels with a high degree of discrimination. The best refolding conditions resulted in a tenfold increase in the intensity of the dot blot compared to the control. The only refolding additive that consistently yielded good results was L-arginine. The statistical analysis identified both cooperative and negative interactions between the different refolding additives. The high-throughput approach described in this study that enabled overproduction, purification and refolding of PA in a simple and straightforward manner, can be potentially useful for the rapid screening of adequate refolding conditions for other overexpressed antigenic proteins.

El antígeno protector de Bacillus anthracis (protective antigen, PA) es una importante proteína inmunogénica, en la que se basan tanto las vacunas contra el ántrax/carbunclo como varios métodos diagnósticos. Para estas aplicaciones es esencial que el PA mantenga sus propiedades antigénicas, para lo cual debe estar correctamente plegado. En este estudio se obtuvieron altos niveles del PA en Escherichia coli recombinante. Inicialmente, la proteína se acumuló desnaturalizada en cuerpos de inclusión, lo que facilitó su eficiente purificación en simples pasos de lavado, pero no fue reconocida por anticuerpos específicos. Se analizaron las condiciones de replegado con un sistema de alto rendimiento, evaluando simultáneamente casi un centenar de condiciones diferentes. La recuperación de la capacidad del PA de ser reconocido por los anticuerpos se evaluó por dot blot utilizando un coeficiente que proporcionó una medida de los niveles de proteína correctamente plegada, con un alto grado de discriminación. Las mejores condiciones de renaturalización permitieron un aumento de diez veces en la intensidad de los dot blots con respecto del control. El único aditivo que produjo buenos resultados de forma constante fue la L-arginina. El análisis estadístico de las interacciones entre los diferentes aditivos de replegado permitió identificar tanto interacciones cooperativas como negativas. El enfoque de alto rendimiento descripto en este trabajo, que permitió la sobreproducción, purificación y plegado del PA de una manera sencilla y directa, puede ser potencialmente útil para el rápido screening de las condiciones adecuadas de replegado cuando se sobreexpresan otras proteínas antigénicas.

Differential expression of stem cell-like proteins in normal, hyperplastic and dysplastic oral epithelium

Objective The identification of stem cells (SC) remains challenging. In the human oral mucosal epithelium, these cells are believed to be in the basal layer (stem cell niche), but their exact location is unclear. The aim of this study was to examine the dysplastic oral epithelium for these SC-like proteins in order to assess their diagnostic value as biomarkers complementing the histological grading of dysplasia. Material and Methods Thirty oral epithelial dysplasia (OED), 25 oral lichen planus (OLP), 10 oral hyperkeratosis and 5 normal oral epithelium (OE) were immunohistochemically examined for four SC markers [integrin β1, neuron-glial-2 (NG2), notch 1 (N1) and keratin 15 (K15)]. Results Three of four SC markers were heterogeneously detected in all samples. K15 overexpression in the lower two-thirds of severe OED suggests an expanded SC niche. Integrin β1 distribution pattern was not measurably different between OEDs and control. NG2 was almost negative to absent in all samples examined. N1 expression was weak and highly variable in normal and dysplastic epithelium, making it an unreliable epithelial stem cell marker. Conclusions Present findings suggest that these markers were unable to identify individual epithelial stem cells. Instead, subpopulations of cells, most probably stem cells and transit amplifying cells with stem cell-like properties were identified in the dysplastic oral epithelium. The characteristic expressions of K15 might be of diagnostic value for oral dysplasia and should be investigated further. .

Proteomic Screening of Antigenic Proteins from the Hard Tick, Haemaphysalis longicornis (Acari: Ixodidae)

Proteomic tools allow large-scale, high-throughput analyses for the detection, identification, and functional investigation of proteome. For detection of antigens from Haemaphysalis longicornis, 1-dimensional electrophoresis (1-DE) quantitative immunoblotting technique combined with 2-dimensional electrophoresis (2-DE) immunoblotting was used for whole body proteins from unfed and partially fed female ticks. Reactivity bands and 2-DE immunoblotting were performed following 2-DE electrophoresis to identify protein spots. The proteome of the partially fed female had a larger number of lower molecular weight proteins than that of the unfed female tick. The total number of detected spots was 818 for unfed and 670 for partially fed female ticks. The 2-DE immunoblotting identified 10 antigenic spots from unfed females and 8 antigenic spots from partially fed females. Matrix Assisted Laser Desorption Ionization-Time of Flight Mass Spectrometry (MALDI-TOF) of relevant spots identified calreticulin, putative secreted WC salivary protein, and a conserved hypothetical protein from the National Center for Biotechnology Information and Swiss Prot protein sequence databases. These findings indicate that most of the whole body components of these ticks are non-immunogenic. The data reported here will provide guidance in the identification of antigenic proteins to prevent infestation and diseases transmitted by H. longicornis.

Proteomic Screening of Antigenic Proteins from the Hard Tick, Haemaphysalis longicornis (Acari: Ixodidae)

Proteomic tools allow large-scale, high-throughput analyses for the detection, identification, and functional investigation of proteome. For detection of antigens from Haemaphysalis longicornis, 1-dimensional electrophoresis (1-DE) quantitative immunoblotting technique combined with 2-dimensional electrophoresis (2-DE) immunoblotting was used for whole body proteins from unfed and partially fed female ticks. Reactivity bands and 2-DE immunoblotting were performed following 2-DE electrophoresis to identify protein spots. The proteome of the partially fed female had a larger number of lower molecular weight proteins than that of the unfed female tick. The total number of detected spots was 818 for unfed and 670 for partially fed female ticks. The 2-DE immunoblotting identified 10 antigenic spots from unfed females and 8 antigenic spots from partially fed females. Matrix Assisted Laser Desorption Ionization-Time of Flight Mass Spectrometry (MALDI-TOF) of relevant spots identified calreticulin, putative secreted WC salivary protein, and a conserved hypothetical protein from the National Center for Biotechnology Information and Swiss Prot protein sequence databases. These findings indicate that most of the whole body components of these ticks are non-immunogenic. The data reported here will provide guidance in the identification of antigenic proteins to prevent infestation and diseases transmitted by H. longicornis.

Indirect ELISA for diagnosis of Brucella ovis infection in rams / ELISA indireto para diagnóstico da infecção por Brucella ovis em carneiros

Brucella ovis is a major cause of epididymitis in sexually mature rams, resulting in subfertility, infertility, and economic losses for the sheep industry worldwide. The aim of this study was to develop an indirect ELISA (iELISA) using recombinant proteins, namely rBoP59 and rBP26, as antigens for serological diagnosis of B. ovis infection. The BoP59 and BP26 recombinant proteins were expressed in E. coli and purified by affinity chromatography. Antigenicity was tested by Western blot and iELISA. Standardization of iELISA was performed with 500ng and 1µg BoP59 and rBP26 per well, testing serum from uninfected and experimentally infected rams. rBP26 was effective in distinguishing positive from negative rams. The rBP26 iELISA developed in this study is the first to use a completely purified rBP26 as antigen resulting in high sensitivity (100%) and specificity (90.2%), and an overall accuracy equal to 1.0...

Brucella ovis é uma das principais causas de epididimite em carneiros sexualmente maduros, resultando em subfertilidade e infertilidade e consequentes perdas econômicas para a ovinocultura em todo o mundo. O objetivo deste estudo foi desenvolver ELISA indireto (ELISAi), utilizando como antígeno proteínas recombinantes BoP59r e BP26r para diagnóstico da infecção por B. ovis. BoP59r e BP26r foram expressas em E. coli e purificadas por cromatografia de afinidade e a antigenicidade testada por Western blot e ELISAi. A padronização do ELISAi foi realizada testando 500 ng e 1 µg de BoP59r e BP26r por poço e soros de carneiros infectados e não infectados. A BP26r foi eficiente em diferenciar ovinos negativos de positivos. O ELISAi com BP26 desenvolvido neste estudo foi o primeiro a utilizar BP26 completamente purificada como antígeno, resultando em elevada sensibilidade (100%) e sensibilidade (90,2%), com acurácia igual a 1,0...

Cloning, expression and characterization of SeM protein of Streptococcus equi subsp. equi and evaluation of its use as antigen in an indirect ELISA / Clonagem, expressão e caracterização de proteína SeM de Streptococcus equi subsp. equi e avaliação de sua utilização como antígeno em um ELISA indireto

Strangles is an economically important horse disease caused by Streptococcus equi subsp. equi. The diagnosis can be confirmed either directly by bacterial isolation and PCR or by ELISA, which is an indirect method based on the detection of serum antibodies. The aim of this study was to clone, express and characterize the SeM protein of Streptococcus equi subsp. equi, evaluate its use as antigen in indirect ELISA and determine its performance to distinguish sera of negative, vaccinated and positive animals. This was initially performed by cloning the gene encoding the SeM protein and its expression in Escherichia coli. Subsequently, the protein produced was characterized and used as antigen in ELISA. Serum samples for evaluation were taken from 40 negative foals, 46 horses vaccinated with a commercial vaccine against strangles and 46 horses diagnosed with the disease. The test showed high specificity and sensitivity, allowing discrimination between negative and positive, positive and vaccinated animals, and vaccinated animals and negative sera. Thus, it was concluded that the protein produced rSeM, which can be used as antigen for disease diagnosis, and the described ELISA might be helpful to evaluate the immune status of the herd...

A adenite equina é uma enfermidade economicamente importante de equinos, causada por Streptococcus equi subsp. equi. Seu diagnóstico pode ser confirmado de forma direta, por meio de isolamento bacteriano e de PCR, ou de forma indireta, por meio de ELISA, método baseado na detecção de anticorpos séricos. O objetivo deste estudo foi clonar, expressar e caracterizar a proteína SeM de Streptococcus equi subsp. equi, avaliar sua utilização como antígeno em um ELISA indireto e determinar a capacidade do teste de distinguir soros de animais negativos, vacinados e positivos. Para tal, foi inicialmente realizada a clonagem do gene que codifica para a proteína SeM e sua expressão em Escherichia coli. Posteriormente, a proteína produzida foi caracterizada e utilizada como antígeno em um teste de ELISA indireto. Para avaliação do teste, foram utilizadas amostras de soro de 40 potros negativos, de 46 equinos vacinados com uma vacina comercial contra adenite equina e de 46 equinos com diagnóstico da doença. O teste demonstrou alta sensibilidade e especificidade, permitindo discriminar entre soros negativos e positivos, positivos e de animais vacinados, e negativos e de animais vacinados. Assim, conclui-se que a proteína rSeM produzida pode ser usada como antígeno para o diagnóstico da enfermidade e que o ELISA descrito pode ser útil para avaliar o estado imunológico do rebanho...

O papel de imunoglobulinas na nefropatia da leptospirose em suínos / The role of immunoglobulins in nephropathy of leptospirosis in pigs

A leptospirose é uma antropozoonose endêmica em todo o mundo, que afeta o homem e várias espécies de animais domésticos e silvestres. No início da infecção há produção de IgM para o controle da infecção e após alguns dias, IgG são produzidas e provocam lise das leptospiras circulantes. Objetivou-se neste estudo identificar depósitos de antígeno de leptospiras e imunoglobulinas no tecido renal, para avaliar o papel de imunoglobulinas na patogênese da nefropatia da leptospirose em suínos. Foram colhidas 139 amostras de sangue e rim de suínos das cidades de Teresina/PI e Timon/MA, que foram avaliadas pela SAM, imunoistoquímica e PCR. Nefrite intersticial, fibrose, vasculite, tumefação do tufo glomerular e hipercelularidade difusa foram as principais alterações histopatológicas encontradas. A imunoistoquímica detectou antígeno de leptospira em 60 suínos. Depósitos de IgG, IgM e IgA foram observados no endotélio de capilares glomerulares, dos capilares intertubulares e na cápsula de Bowman, com marcação focal, difusa, global e segmentar. A deposição de IgM e IgA foi significantemente maior nos suínos infectados. Estranhamente depósitos de IgG foi significantemente maior nos suínos não infectados, onde não havia presença de antígeno de leptospiras e nem lesão túbulo-intersticial. Concluímos que antígeno de leptospiras no rim de suínos está relacionado a depósitos de IgM e IgA mas não a depósitos de IgG.

Leptospirosis is an endemic worldwide anthropozoonosis, affecting humans and several species of domestic and wild animals. At the beginning of infection is the production of IgM to control the infection and after a few days, IgG is produced and cause lysis of circulating leptospires. The objective of this study was to identify deposits of immunoglobulins and antigens of leptospires in kidney tissue, to assess the role of immunoglobulins in the pathogenesis of leptospirosis nephropathy in pigs. We collected 139 blood samples and kidney of pigs from the cities of Timon/MA and Teresina/PI, to be evaluated by SAM, immunohistochemistry and PCR. Interstitial nephritis, fibrosis, vasculitis; swollen glomeruli hypercellularity and diffuse in a pig were main pathological changes found. Immunohistochemistry leptospira antigen detected in 60 pigs. Deposits of IgG, IgM and IgA were observed in the endothelium of glomerular capillaries, the capillaries intertubulares and the Bowman's capsule, marked focal, diffuse, global and segmental. The deposition of IgM and IgA was significantly higher in infected pigs, strangely deposits of IgG was significantly higher in non-infected pigs, where there was no presence of antigen leptospires nor tubulointerstitial injury. We conclude that Leptospira antigen in porcine kidney relates to deposits of IgM and IgA but not IgG deposits.

Efeitos de compostos naturais, sintéticos e da fototerapia antifúngica sobre Candida tropicalis resistente ao fluconazol / Effects of natural compounds, synthetic and herbal medicine on Candida tropicalis antifungal fluconazole-resistant

A candidíase é uma infecção oportunista provocada por diversas espécies de fungos do gênero Candida, frequentemente encontrados integrando a microbiota, da superfície cutânea, no trato gastrointestinal e cavidades mucosas do ser humano desde o seu nascimento. A incidência das infecções fúngicas sistêmicas têm aumentado consideravelmente nas últimas décadas em função do grande número de pacientes com SIDA, a grande quantidade de transplantes e condições crônicas como o câncer, a terapia prolongada com imunossupressores e o uso de agentes corticosteroides. Além disso, a exposição prolongada aos antifúngicos azólicos promove a seleção de patógenos resistentes. No presente estudo avaliou-se a atividade antifúngica do complexo Rutênio-pirocatecol (RPC) frente a um isolado clinico de Candida tropicalis resistente ao fluconazol. A metodologia empregada para os testes de susceptibilidade foi de acordo com o documento M27-A3 do National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS, 2008). Esplenócitos de camundongos Balb/c foram obtidos de forma asséptica para avaliar a citotoxicidade do composto para células de mamíferos. O estresse oxidativo promovido pelo composto foi avaliado através da reação ao ácido tiobarbitúrico (TBARS) e ensaios de fluorescência com a sonda diclorodihidrofluoresceína diacetato (DCFH2DA). O Calcofluor White foi empregado para avaliar a integridade da parede celular. A análise ultraestrutural foi realizada através da microscopia eletrônica de varredura e transmissão. Os resultados encontrados para os testes de atividade antifúngica foram analisados através do teste estatístico ANOVA e pós-teste Dunnett. Os resultados encontrados para os testes de atividade antifúngica do RPC mostraram uma Concentração Inibitória de 50% (IC50) de 20,3 μM, enquanto em esplesnócitos a concentração efetiva de 50% foi de 325 μM mostrando um índice de seletividade igual a 16...

Candidiasis is an opportunistic infection caused by several species of fungi of the genus Candida, often found is the microbiota, on the skin, gastrointestinal tract and mucous cavities of the human beings birth. The incidence of systemic fungal infections have increased considerably in recent decades due to the large number of AIDS patients, the large number of transplants and chronic conditions such as cancer, prolonged therapy promotes the selection of resistant pathogen with immunosuppressant and corticosteroid agents. Also prolonged exposure azole antifungals to make them strong candidates for patients resistance. In the present study we evaluated the antifungal activity of Ruthenium-pyrocatechol complex (RPC) against a clinical isolate of Candida tropicalis resistant to fluconazole. The methodology for susceptibility testing was in accordance with the M27-A3 document of there National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS, 2008). Splenocytes from Balb/c mice were obtained aseptically to evaluate the cytotoxicity of the compound to mammalian cells. Oxidative stress caused by the compound was assessed by reaction to thiobarbituric acid (TBARS) and fluorescence assays with the probe diclorodihidrofluoresceína diacetate (DCFH2DA). The Calcofluor White was used to evaluate the integrity of the cell wall. The ultrastructural analysis was performed by scanning and transmission electron microscopy. The results for the antifungal activity tests were analyzed using ANOVA and pos-test Dunnett test statistic. The results for the tests of antifungal activity of the RPC showed a 50% inhibitory concentration (IC50) of 20.3 μM while in splenocytes the 50% effective concentration was 325 μM showing a selectivity index of 16...